냉동정액의 제조

1. 정액 제조과정

1) 정액채취 (1회 채취시 평균)

* 정자수 : 6∼20억/□

* 정액량 : 5∼7□

2) 정액검사 및 희석 *정자수 계산

* 정자활력 및 생존율

* 일반성상 검사

* 기형율 검사

* 정자 강도 검사

3) 냉각 *10□희석액 + 정액

* 희석정액 5℃로 냉각(4시간 소요)

4) 2차,3차 희석 *5℃ 에서 기초 희석후 1차와 동량으로 2차액 희석

* 20분 간격으로 4회에 나누어 분주 (첨가)

* 0.5ml에 A(+++)급 생존

* 정자 2,000∼2,500만 조정 (융해후 생존정자)

* 5℃에서 1시간 이상 GLYCERINE형평 실시

5) 예비동결 및 융해검사

* -140℃까지 12∼14분에 걸쳐 예비동결 후 LN2에 10분간 침적 (컴퓨터에 의한

자동 동결)

6) 정액제조(봉함) * 축종별, 개체별 분주

* straw당 2,000∼2,500만 충진 자동제조

* 0.5ml straw에 자동 분주

7) 검사 및 동결 포장 * 5번과 동일하게 정액동결

* 자동포장기에 의한 자동포장

* 개체별 최종품질 검사후 인계

8) 최종검사 * 38℃에서 20초간 융해

* 융해후 정액의 온도 : 25℃

* 검사판정 : A(+++)급 생존정자 45%이상

9) 기타

* 정액공급

* 일선 수정소, 낙농가

* 해외수출

2. 정액 일반검사 및 품질검사(Quality Control)

1) 일상적 검사

가) 원정액 검사

○ 육안검사

- 채취량, 색깔, 농도, 이물질 혼입등 : 채취직후 육안 검사

- 정자수 계산 : 전광분광계(Spectronic-20)활용 기계적 계산

○ 현미경 검사

- 활력검사 : 정자의 생존율, 운동성 등을 현미경이용 검사

- 기형율검사 : 정액의 형태적 정상율 염색후 검사

○ 기타 검사

- 정자활력측정기 검사 : 개체별 월 1회 정자수, 활력, 전진운동율, 이동거리 검사

나) 동결정액 검사

○ 육안검사

- 스트로동결, 충진, 봉함상태등 : 정액 동결전후 스트로충진, 봉함상태 등 육안검사

○ 현미경검사

- 활력검사·내동성검사 : 원정액 스트로 포장전 개체별 예비동결 활력검사 동결융해검사 : 스트로 포장 동결후 융해 활력검사

○ 기타검사

- 스트로 포장검사 : 동결정액 스트로, 가브렛, 랙크 포장상태 검사

2) 품질관리 검사

가) 원정액 검사

○ 생존정자 염색검사

- 검사목적 : 기존의 현미경을 이용한 생존율 검사의 주관성을 배제하기 위하여 개체별 시료채취 염색 후 생존정자 검사

- 검사방법 : Aniline Blue-Eosin Blue법

나) 동결정액검사

○ 기형율 검사 : 기존 원정액의 기형율검사의 동결처리 후 기형율 추가검사

- 검사방법 Fuchshin 검사법

- 검사회수 : 개체별 월1회(검정우 기준)

○ 첨체정상율(Percent of Intact Acrosome)검사

- 검사목적 : 생존정자중 정자두부 첨체(Acrosome)정상율 판정검사B

- 검사방법 : B.O Medium 검사법

- 검사회수 : 개체별 주 1회 (검정우 기준)

다) 통합 검사항목

○ H.O.S.T (Hypo-Osmotic Swelling Test)검사

- 검사목적 : 동결정액의 융해 후 생존정자(유효정자)수의 객관적 검증

- 검사방법 : 특수배양액조제 정자부유 배양검사

- 검사회수 : 개체별 매 채취시